Prueba Molecular para Enfermedades Cerebrovasculares

A continuación se describirán tres técnicas moleculares que pueden ser de utilidad para el diagnóstico de enfermedades cerebrovasculares, teniendo en cuenta que las dos primeras se utilizan para el diagnostico de la enfermedad cerebrovascular y la ultima se utiliza para el diagnóstico de la enfermedad de Fabry.

El miR-21 es un fuerte factor antiapoptótico en algunos sistemas biológicos. Mediante la utilización de la hibridación in situ (ISH) y microdisección de captura por láser (LCM) en combinación RT-PCR para investigar la expresión de miR-21. ISH reveló que el miR-21 se sobre expresa en las neuronas de la zona de frontera isquémica (IBZ) y análisis en tiempo real RT-PCR cuantitativa reveló que el accidente cerebrovascular aumenta miR-21 niveles 3 veces mayores en las neuronas aisladas de la IBZ por LCM.

En tiempo real de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (qRT-PCR) es el método más sensible y específico aplicado para cuantificar niveles circulantes miRNAs, pero se presentan dificultades como: muy poca cantidad de ARN recuperado de suero o plasma y la falta de controles endógenos apropiados para la normalización. Debido a que el ARN extraído de plasma / sérica es muy poco, un procedimiento de normalización es necesario, además drogas para antiplaquetario y anticoagulación pueden afectar la cuantificación de miARN en muestras de sangre.

Se ha desarrollado una nueva aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa-inmuno (PCR) (denominado Tag simultánea múltiple [Mustag]) para la medición del nivel de proteína GLA en muestras de sangre. Se comparó la sensibilidad del método Mustag con placas o perlas magnéticas con las de ELISA para GLA humana recombinante y encontramos que la sensibilidad máxima aparente fue mayor para los primeros que para los segundos, proporcionando una estimación más clara de los niveles de proteína GLA en el suero y plasma con mínima o ningún ruido de fondo.

Sachie Nakano, Yoshihito Morizane, Noriko Makisaka, Toshihiro Suzuki, Tadayasu Togawa, Takahiro Tsukimura, Ikuo Kawashima, Hitoshi Sakuraba, Futoshi Shibasaki. Development of a Highly Sensitive Immuno-PCR Assay for the Measurement of a-Galactosidase A Protein Levels in Serum and Plasma. PLOS ONE November 2013. Volume 8. Issue 11.

Buller B, Liu X, Wang X, Zhang RL, Zhang L, Hozeska-Solgot A, Chopp M, Zhang ZG. MicroRNA-21 protects neurons from ischemic death. FEBS J. 2010 Oct;277(20):4299-307

Meng Li, Junping Zhang. Circulating MicroRNAs: Potential and Emerging Biomarkers for Diagnosis of Cardiovascular and Cerebrovascular Diseases. Biomed Res Int. 2015;2015:730535.