Enfermedades Cerebrovasculares

Buenas tardes a todos en esta ocasión me permito publicarles un video acerca de la fisiopatología de las enfermedades cerebrovasculares, espero les sea de gran utilidad y pueda resolver mucha de las dudas que tengan, tengan un excelente día.

ADN Recombinante

A continuación vamos a citar dos ejemplos de ADN recombinante tanto uno que encontramos de manera natural en la naturaleza y uno que ha sido obtenido a través de experimentos en laboratorio y ha sido aplicado a la farmacología actual.

Las aflatoxinas son metabolitos secundarios tóxicos principalmente de los hongos Aspergillus flavus y Aspergillus parasiticus, los cuales son potentes mutágenos y cancerígenos de los alimentos y la exposición del hombre a ellos es continuo. Las aflatoxinas se ligan al ADN, ARN y proteínas formando aductos AFB₁-ADN que se acumulan por años y dañan desde los virus al hombre, estos aductos actúan como biomarcadores de largo tiempo de riesgo de enfermedad. Las aflatoxinas se activan en presencia del citocromo P₄₅₀ como una molécula inestable 8,9 epóxido AFB, que se liga al N⁷ de la guanina y se transforma en los cancerígenos activos o aductos AFB₁-Gua y finalmente en los aductos AFB₁-FAPY y son una medida objetiva de la exposición humana a cancerígenos ambientales. Los aductos representan la exposición, absorción distribución, metabolismo, reparación del ADN y cambio celular.

El rFVIIa es un fármaco diseñado para promover la hemostasia activando la vía extrínseca de la coagulación. Es una glucoproteína dependiente de vitamina K elaborada bajo técnicas de ADN recombinante clonado y expresado del factor VII de la cascada de la coagulación, que se cultiva en células renales de hámster. El rFVIIa ejerce su acción hemostática, sólo al interactuar con el factor tisular (FT) en el sitio de la lesión, que se encuentra en las capas profundas de la pared vascular. Es proteolíticamente inerte en la circulación y la infusión del fármaco no produce activación sistémica de la coagulación excepto en situaciones especiales. 

Carvajal M. TRANSFORMACIÓN DE LA AFLATOXINA B1 DE ALIMENTOS, EN EL CANCERÍGENO HUMANO, ADUCTO AFB1-ADN. Revista TIP. Volume 16, Issue 2, 2013, Pages 109–120

Emilio Curiel Balseraa, Victoria Santana Parejab, Javier Muñoz Bonoa. Uso compasivo de factor VIIa recombinante en pacientes con hemorragia grave. Elsevier Volume 135, Issue 10, 2 October 2010, Pages 476–477

Prueba Molecular para Enfermedades Cerebrovasculares

A continuación se describirán tres técnicas moleculares que pueden ser de utilidad para el diagnóstico de enfermedades cerebrovasculares, teniendo en cuenta que las dos primeras se utilizan para el diagnostico de la enfermedad cerebrovascular y la ultima se utiliza para el diagnóstico de la enfermedad de Fabry.

El miR-21 es un fuerte factor antiapoptótico en algunos sistemas biológicos. Mediante la utilización de la hibridación in situ (ISH) y microdisección de captura por láser (LCM) en combinación RT-PCR para investigar la expresión de miR-21. ISH reveló que el miR-21 se sobre expresa en las neuronas de la zona de frontera isquémica (IBZ) y análisis en tiempo real RT-PCR cuantitativa reveló que el accidente cerebrovascular aumenta miR-21 niveles 3 veces mayores en las neuronas aisladas de la IBZ por LCM.

En tiempo real de reacción en cadena de la polimerasa con transcriptasa inversa (qRT-PCR) es el método más sensible y específico aplicado para cuantificar niveles circulantes miRNAs, pero se presentan dificultades como: muy poca cantidad de ARN recuperado de suero o plasma y la falta de controles endógenos apropiados para la normalización. Debido a que el ARN extraído de plasma / sérica es muy poco, un procedimiento de normalización es necesario, además drogas para antiplaquetario y anticoagulación pueden afectar la cuantificación de miARN en muestras de sangre.

Se ha desarrollado una nueva aplicación de la reacción en cadena de la polimerasa-inmuno (PCR) (denominado Tag simultánea múltiple [Mustag]) para la medición del nivel de proteína GLA en muestras de sangre. Se comparó la sensibilidad del método Mustag con placas o perlas magnéticas con las de ELISA para GLA humana recombinante y encontramos que la sensibilidad máxima aparente fue mayor para los primeros que para los segundos, proporcionando una estimación más clara de los niveles de proteína GLA en el suero y plasma con mínima o ningún ruido de fondo.

Sachie Nakano, Yoshihito Morizane, Noriko Makisaka, Toshihiro Suzuki, Tadayasu Togawa, Takahiro Tsukimura, Ikuo Kawashima, Hitoshi Sakuraba, Futoshi Shibasaki. Development of a Highly Sensitive Immuno-PCR Assay for the Measurement of a-Galactosidase A Protein Levels in Serum and Plasma. PLOS ONE November 2013. Volume 8. Issue 11.

Buller B, Liu X, Wang X, Zhang RL, Zhang L, Hozeska-Solgot A, Chopp M, Zhang ZG. MicroRNA-21 protects neurons from ischemic death. FEBS J. 2010 Oct;277(20):4299-307

Meng Li, Junping Zhang. Circulating MicroRNAs: Potential and Emerging Biomarkers for Diagnosis of Cardiovascular and Cerebrovascular Diseases. Biomed Res Int. 2015;2015:730535.

Prueba de Tamizaje y Confirmatoria para Enfermedades Cerebrovasculares

Como ya se ha tratado antes en diversos posts, las enfermedades cerebrovasculares son siempre secundarias a otro tipo de enfermedades, por ello en este post acerca de pruebas de tamizaje y confirmatorias seguiremos profundizando acerca de la Enfermedad de Fabry, como lo hicimos en posts anteriores.

Prueba de Tamizaje

Como prueba de tamizaje se puede analizar la actividad enzimática de alfa-galactosidasa A en leucocitos o en cultivos celulares y posterior a ello realizar un estudio molecular del gen GLA. El estudio molecular del gen es obligatorio en mujeres, ya que la actividad enzimática puede ser normal.

En caso de una alta sospecha clínica con actividad enzimática normal o sin encontrarse mutación podría ser de utilidad el hallazgo de valores de Gb3 elevados en plasma/orina o depósitos en órgano diana.

Además de esto también se pueden tener en cuenta signos y sintomas que son característicos de la enfermedad cerebrovascular, por ello adjunto una tabla acerca de ello que puede ser de gran utilidad.

Prueba Confirmatoria

Como prueba confirmatoria se puede realizar un inmuno-PCR de 40 ciclos. También puede medirse el nivel de proteína GLA mediante enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA), pero esta prueba no es altamente sensible debido al ruido de fondo. Por ello inmuno-PCR  se ha convertido en una técnica novedosa ya que mide los polimorfismo pE66Q y p.D313Y del gen GLA en DNA olygonucleótido, visualizando los resultados en un corrido electroforético.

M. Domínguez Sardiñaa, F.J. García Soidánb, F.I. Lago Deibec. Enfermedad cerebrovascular (I): prevención primaria y diagnóstico. ELSEVIER Volume 12, Supplement 1, 2005, Pages 11–28.

Abelardo Garcı´a de Lorenzo. Consenso para el estudio y tratamiento de la enfermedad de Fabry. ELSEVIER. Volume 137, Issue 4, 9 July 2011, Pages 178–183.

Sachie Nakano, Yoshihito Morizane, Noriko Makisaka, Toshihiro Suzuki, Tadayasu Togawa, Takahiro Tsukimura, Ikuo Kawashima, Hitoshi Sakuraba, Futoshi Shibasaki. Development of a Highly Sensitive Immuno-PCR Assay for the Measurement of a-Galactosidase A Protein Levels in Serum and Plasma. PLOS ONE November 2013. Volume 8. Issue 11.

miRNA relacionadas con Enfermedades Cerebrovasculares

Se realizó la hibridación in situ y microdisección con la RT-PCR para determinar la expresión y el papel que cumple 21-microARN (miR-21) después de una ECV. La hibridación reveló que el miR-21 hizo una regulación positiva de expresión en las neuronas de la zona límite isquémica, y el análisis cuantitativo en tiempo real de RT-PCR reveló que el accidente cerebrovascular aumentó los niveles de miR-21 aproximadamente tres veces en las neuronas aisladas a partir de la zona de frontera isquémica.El miR-21 puede ser una molécula terapéutica atractiva para el tratamiento de ECV.

También se pueden observar diferentes miRNA circulantes en plasma que se ven alterados en las enfermedades cerebrovasculares, los cuales son miR-54, miR-39, miR-1249, miR-17-5p, U6, miR-454, 5S rRNA, and RNU6b. Incluyo el link de la tabla 1 del artículo revisado en donde se detallan muchos otros miRNA

miRNA Tabla 1

Buller B, Liu X, Wang X, Zhang RL, Zhang L, Hozeska-Solgot A, Chopp M, Zhang ZG. MicroRNA-21 protects neurons from ischemic death. FEBS J. 2010 Oct;277(20):4299-307 

Meng Li, Junping Zhang. Circulating MicroRNAs: Potential and Emerging Biomarkers for Diagnosis of Cardiovascular and Cerebrovascular Diseases. Biomed Res Int. 2015;2015:730535.